Kolorimetrijska metoda hemijske analize krvi

Kolorimetrijska metoda je analiza zasnovana na poređenju zasićenosti boja proučavane i poznate supstance. Rezultati fizičko-hemijskih testova od velike su vrijednosti za mnoge grane nauke, ali najviše se istraživanja koristi u medicini.

Suština kolorimetrijske metode

Postoji mnogo vrsta analiza pomoću kojih se određuje hemijski sastav supstanci. Neki od njih su univerzalni i široko se koriste u raznim poljima, drugi su specifični, s većom preciznošću. Kolorimetrijska metoda odnosi se na univerzalnu.

Suština analize je da se zasićenost boje rastvora nepoznatom koncentracijom poredi sa bojom standardnog rastvora. Tokom analize, kao rezultat interakcije proučavane komponente sa određenim reagensom, nastaje obojeno jedinjenje. Nakon završetka reakcije, rezultirajuća nijansa se upoređuje sa bojom rastvora čija je koncentracija već poznata.

Smatra se da je osnivač kolorimetrije Robert Boyle. Stiskom tanina razlikovao je željezo od bakra u rastvoru. to je bio Boyle ko je primetio, da što je veća koncentracija gvožđa u rastvoru, bogatiji je ton potonjeg.

Kolorimetrija

Kolorimetrija je metoda za određivanje količine supstance u rastvorima. Analiza se zasniva na zakonu Booger-Lambert-Behr: kada snop svetlosti udari u gusti apsorbujući sloj materije, njen intenzitet slabi.

Kolorimetrijska metoda za određivanje koncentracije supstance može koristiti vizuelno Poređenje ili Poređenje pomoću posebnih uređaja za merenje intenziteta boje. Poređenje se vrši na direktan i kompenzacijski način.

1. Pravo. Metoda uključuje poređenje nivoa boje ispitnog rastvora pri određenoj gustini i temperaturi tečnosti sa referentnim rastvorom. Kada se koriste fotokolorimetri i spektrofotometri, destilirana voda se koristi kao referentno rješenje. Uređaji mjere trenutnu snagu, što ovisi o intenzitetu svjetlosti.
2. Kompenzacija. Metoda se temelji na dovođenju boje proučavanog uzorka u referencu. Rezultat se postiže dodavanjem rastvarača ili povećanjem visine sloja medija za bojenje.

Korišćenje spektrofotometra, monohromatora i drugih preciznih instrumenata dodatno pojednostavljuje već jednostavno metoda istraživanja i omogućava vam da povećate tačnost rezultata. Ovi uređaji su u stanju da izmere količinu prenosa svetlosti i odrede talasnu dužinu.

Gdje je ...

Kolorimetrijska metoda analize koristi se kada je poznat tačan hemijski sastav, postoji referentni uzorak za usporedbu, a temperatura testa i referentnog uzorka je ista. Ako je potrebno brzo odrediti količinu obojene supstance, ali je toliko mala da je nemoguće primijeniti analitičku metodu.

Kolorimetrija se široko koristi u medicini u kliničkim biohemijskim istraživanjima iu drugim oblastima:

• farmakološka industrija;
• industrija hrane i alkohola;
• Agronomija (određivanje kvaliteta zemljišta).

Prednosti i mane

Kolorimetrijska metoda, kao i svaka druga, ima prednosti i nedostatke.

Prednosti uključuju sljedeće:

• jednostavnost analize, minimum pripremnih procedura;
• mogućnost testiranja čak i sa malom količinom proučavanog materijala;
• nema potrebe za skupom opremom, iako se u posljednje vrijeme sve više koriste savremeni uređaji koji nisu jeftini. Ali oni pružaju najtačniji rezultat.

Nedostaci: tačnost analize je niska u poređenju sa analitičkim metodama.

Biuretička metoda određivanja proteina

Proteini u krvnom serumu pokazatelj su koji odražava stanje homeostaze. Povećanje koncentracije visoko molekularno jedinjenje u krvi se zove hiperproteinemija, nizak sadržaj je hipoproteinemija.

Proteini u krvnom serumu imaju različit sastav, strukturu, svojstva i obavljaju različite funkcije. Podijeljeni su na enzime, hormone, imunoglobuline i druge. Za sve grupe proteina svojstvene su brojne zajedničke karakteristike na osnovu kojih su razvijene metode za određivanje visokomolekularnih organskih jedinjenja u biološkim tečnostima.

Od svih metoda u kliničkoj biohemiji najčešće se koriste kolorimetrijske metode određivanja proteina. Oni su relativno jeftini, što je važno za budžetske organizacije. i prilično su jednostavni. Najčešća je biuretska metoda. Suština metode: proteini u u alkalnom mediju , reaguju sa bakar sulfatom i formiraju ljubičasta jedinjenja. Sadržaj proteina u krvi određuje se zasićenjem bojenja. Biomaterijal za analizu uzima se ujutro natašte.

Analiza je veoma tačna, ali postoje faktori koji utiču na koncentraciju proteina u krvi:

• fizička aktivnost neposredno prije prikupljanja biomaterijala;
• posljednje sedmice trudnoće i dojenja;
• upotreba lijekova "kortikotropin", "Miscleron"," klofibrat "doprinosi povećanju sadržaja proteina u krvi, a upotreba "Pirazinamida" i estrogena dovodi do smanjenja koncentracije;
• pogrešan položaj ruke tokom prikupljanja biomaterijala.

Određivanje željeza

Količina gvožđa u krvi je jedan od glavnih indikatora u dijagnostici različitih bolesti. Supstanca je koncentrisana u hemoglobinu, koji obezbeđuje transport kiseonika do tkiva. Za određivanje gvožđa kolorimetrijskom metodom, rastvor batofenantrolina (0,02%) najčešće se koristi kao glavni reagens. Biomaterijal-serum bez tragova hemolize.

Suština metode: tijekom interakcije iona željeznog željeza i sulfatiranog batofenantrolina stvara se obojeni kompleks čija se zasićenost određuje fotometrijski. Da bi se dobio transparentan rastvor, neophodno je poštovati pravila uzorkovanja biomaterijala, ali da bi se tačno odredile optičke gustine kompleksa gvožđe-liganda, gvožđe se oslobađa iz hemoglobina pomoću hidroksilamina i deterdženata (natrijum dodecil sulfat). Prema rezultatu testa određuje se prisustvo i stepen patologije. Normalno, koncentracija gvožđa treba da bude:

• 14.2 - 26.0 mmol / l (muškarci);
• 10,6-21,7 mmol / l (žene).

Nedostatak gvožđa obično je povezan sa gubitkom krvi, nedovoljnim unosom sa ishranom ili slabom apsorpcijom u gastrointestinalnom traktu.

Određivanje holesterola

Holesterol je organska supstanca sadržana u ćelijskom omotaču mnogih organizama, uključujući ljude. To je neophodno za proizvodnju holekalciferol i steroidni hormoni. Nivo holesterola od 3,37-5,2 mmol / l smatra se normalnim. Povećan sadržaj da li je jedan od glavnih uzroka ateroskleroze.

Kolorimetrijske metode za određivanje holesterola omogućavaju vam prepoznavanje vaskularnih bolesti u ranim fazama. Prema patoanatomskim rezultatima, koncentracija lipofilnog alkohola kod pacijenata sa fatalnom ishemijom bila je 6,5-7,8 mmol / l.

Princip kolorimetrijske metode je da se holesterol oksidira 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktazom sa oslobađanjem vodonik-peroksida, koji pretvara p-aminoatipirin u obojeni spoj. Zasićenjem njegove boje određuje se sadržaj holesterola.

Prilikom provođenja testa kod djeteta treba uzeti u obzir da koncentracija holesterola u djetinjstvu ne smije prelaziti 4,1 mmol / l.

Šta je enzimska kolorimetrijska metoda?

Enzimski testovi se zasnivaju na upotrebi reakcija enzima sa visokom aktivnošću. Široko se koriste u analitičkoj hemiji za određivanje različitih supstanci - od nitratnih iona do makromolekula.

Enzimske (enzimske) metode karakteriše specifičnost, što omogućava analizu nekih supstanci u prisustvu drugih supstanci sličnog sastava. Najčešće metode zasnovane na upotrebi enzima-glukoza oksidaze. Test se koristi za određivanje koncentracije glukoze u krvi. Tačnost testa omogućava mu da se koristi za prilagođavanje doze hipoglikemijskih sredstava kod pacijenata sa dijabetesom melitusom tipa 2.

Metoda oksidanta glukoze smatra se jednom od najboljih kvantitativnih metoda za određivanje glukoze. I krv (kapilarna) i serum se mogu koristiti kao biomaterijal, ali plazma je poželjnija jer ima smanjen sadržaj hematokrita, što negativno utiče na tačnost rezultata.

Kinetička metoda fotometrije se uglavnom koristi. Njegova suština leži u činjenici da će s utvrđenim omjerom glukoza oksidaze i peroksidaze, određeno vrijeme nakon početka reakcije, brzina formiranja obojenog spoja biti proporcionalna nivou glukoze u uzorku. Glavna prednost testa je da na rezultat ne utiče prisustvo jedinjenja treće strane u uzorku. Metoda ima i nedostatak – za provođenje testa potrebni su skupi mjerni instrumenti njemačkih ili švedskih proizvođača.

Zaključak

Kolorimetrijsku metodu karakteriše tačnost i lakoća primene. Njegova upotreba u medicini omogućava prepoznavanje različitih patoloških promjena u tijelu u ranoj fazi. Uvođenjem novih tehnologija metoda se unapređuje i postaje sve traženija.